После выкидыша влияние Анны на Генриха несколько ослабло. Он положил глаз на одну из ее придворных дам – Джейн Сеймур. Бурная натура Анны Болейн делала ее притягательной и яркой любовницей, но эта же натура мешала ей быть образцовой женой XVI в. Зато Джейн Сеймур в высшей степени отличали почтительность, скромность и готовность повиноваться. Милая и хорошо знающая свое место, она олицетворяла тихий домашний уют.

У Анны при дворе хватало врагов. Был узкий круг поддерживающих ее мужчин, включая любимого брата Джорджа, но многие ее не любили – кто за устранение Екатерины, кто за религиозные убеждения, а кто за острый язык. Томас Кромвель, который к тому времени сменил кардинала Уолси на посту королевского советника, также хотел дискредитировать несдержанную монархиню. Он не мог не заметить, что страсть короля сошла на нет, и решил организовать хитроумный заговор.

Кромвель стал собирать доказательства любовных похождений Анны с разными мужчинами и даже ее инцеста с братом, Джорджем Болейном. Речь шла не о морали как таковой: будучи королевой и матерью королевских детей, Анна оказывалась виновной в государственной измене и заслуживала смерти. 30 апреля 1536 г. были арестованы друг королевы музыкант Марк Смитон, Джордж и придворный по имени Генри Норрис, а в течение нескольких следующих недель – другие придворные, сторонники Анны. 2 мая арестовали саму Анну, обвиненную не только в супружеской измене и инцесте, но и в заговоре с целью убийства Генриха. Смитон под пытками во всем признался.

12 мая судили всех мужчин, кроме Джорджа. Им не позволили защищать себя, как было принято в делах об измене. За исключением Смитона, никто не признал своей вины, но всех осудили и приговорили к повешению, потрошению и четвертованию.

Суд над Анной и Джорджем прошел в Тауэре в присутствии пэров, защищаться обвиняемым позволили вместе. Анну сочли способной на все, и прежде всего на безнравственность. Инцест шокировал, но никого не удивило, что обвинена в нем именно Анна. Доказательства были сомнительными, но к обвинениям отнеслись серьезно, приняв во внимание прежде всего убийственные показания жены Джорджа Джейн Болейн (леди Рочфорд), которая подтвердила факт инцеста. Обвинительный приговор зачитал Томас Говард, герцог Норфолкский, дядя Анны и Джорджа. Вменяемое им преступление предполагало смертную казнь через сожжение или обезглавливание.

17 мая были казнены все мужчины, повешение и потрошение им заменили отсечением головы. Анна приняла смерть через два дня. Ее приговорили к сожжению или обезглавливанию. Король выбрал меч и вызвал из французского Кале опытного палача, чтобы королева умерла быстро. Взойдя на эшафот, Анна произнесла речь, в которой сказала: «Я молю Бога о спасении короля, о том, чтобы он долго правил вами, потому что властителя благороднее и милосерднее у нас никогда не было, а для меня он всегда был добрым, благородным и высочайшим господином».

Потом, сняв ожерелье, она опустилась на колени, и одна из фрейлин завязала ей платком глаза. Анна и охнуть не успела, как палач быстрым ударом отсек ей голову. Тело и голову опальной королевы завернули в ткань, положили в ящик и тут же похоронили в Тауэре в часовне Святого Петра-в-веригах.

Анна Болейн стала первой из казненных английских королев.