Благодаря современным методам исследования появилась возможность выявить наличие даже небольшого количества гормонов, как полипептидных, так и стероидных. Широко применяются иммунологические методы, призваные выявить содержание гормонов гипоталамуса, гиповиза, яичников, надпочечников и прочих эндокринных желез и тканей в крови. Исследования на содержание гормонов в суточной моче применяются реже. В частности, таким образом можно выявить метаболиты андрогенов 17-КС (дегидроэпиандростерон, андростерон, андростендион), образующиеся в яичниках и надпочечниках организма женщин.

Гормональные функциональные пробы применяются при необходимости топической и дифференциальной диагностики эндокринных заболеваний. Также путем применения гормональных проб возможно уточнить функциональное состояние различных отделов гипоталамо-гипофизарно-яичниковой системы. Функциональные пробы подразделяются на стимуляционные и супрессивные. Стимуляционные пробы представляют собой введение в организм веществ, активирующих работу пораженных тканей, и назначаются при гипофункции желез. Если концентрация гормона растет в ответ на пробу, значит, причина патологии заключается в отсутствии рациональной центральной регуляции. При отсутствии изменений заболевание связано с поражением органа. Супрессивные пробы осуществляются при гиперфункции гормональных желез, в кровь пациента вводятся блокаторы деятельности желез. Если железа функционирует автономно, концентрация гормонов не изменится. Диагностические пары представляют собой анализ, назначаемый при подозрении на патологию эндокринных желез. Берутся анализы не только на гормоны, вырабатываемые эндокринной системой, но и на гормоны гипофиза. Показатель первичного поражения эндокринной железы – повышение уровня гормонов гипофиза и снижение уровня гормонов в периферических железах. Показатель гормоноактивного новообразования – снижение гормонов гипофиза и повышение гормонов периферических желез.

Иммунологические методы. Представляют собой определение содержания гормонов по их иммунологической активности. Путем применения данной группы методом измеряются антигенные детерминанты и характеризуется концентрация гормонов. Принцип действия иммунометодов – узнавание антигенов специфическими антителами, выработанными против гормона. Данная группа методов считается недостаточно точной, в ряде случаев клиническая картина заболевания отличается от предполагаемой согласно выявленному уровню гормона в крови. При этом задействуются более точные методы.

Биологические методы. Представляют собой методы определения уровня гормона по его биологической активности. Путем применения биометодов возможно измерение функционального влияния гормонов и получение характеристики гормональной активности. Биометоды дают представление о биологической мощности гормона. Биометоды должны соответствовать ряду важных требований. Прежде всего, они должны характеризоваться высокой чувствительностью для измерения более низкого уровня гормона в плазме по сравнению с нижним уровнем «нормы», обладать стабильной воспроизводимостью, отличаться технической простотой и специфичностью для определяемых молекул или их фракций.

Методы масс-спектрометрии. Основаны на применении технологии масс-спектрометрии и жидкостного хроматографа с высоким разрешением. Данная группа методов характеризуется высокой производимостью, специфичностью, требуемой чувствительностью и воспроизводимостью.

Виды иммунологических методов:

1. Радиоиммунологическое определение гормонов в различных средах и тканях организма. Данный метод позволяет адекватно оценить функциональное состояние как эндокринной, так и других физиологических систем организма.

2. Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA). В качестве твердофазного носителя применяются полистироловые микропланшеты. При данном виде анализов используются конъюгаты антител с ферментом, при реакции с соответствующими составами образующие окрашенные соединения с определенными оптическими характеристиками. Применение специальных анализаторов позволяет достичь высокой точности измерений.

3. Флуоресцентный иммуноанализ. Принцип работы: применение в качестве метки редкоземельного элемента европия. Путем применения данного метода возможно определить пиктограммовые количества стероидных гормонов и концентрации 0,03–0,15 мЕд/л гиповизарных гормонов.

4. Метод усиленной люминесценции. Относится к методам люминесцентного иммуноанализа. Получил наиболее широкое применение. Принцип работы основан на усилении реакции люминесценции путем добавления люминогенного субстрата (люминол или изолюминол) и особого усилителя, увеличивающего интенсивность и продолжительность свечения. Метод характеризуется высокой чувствительностью и воспроизводимостью. Световой сигнал регистрируется люминометром, особым анализатором.